Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病病症进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次出现肝细胞自身抗锥体到出现1同型冠心病流行病学疼痛的重大突破率在幼儿时代就有极好的描绘，多个肝细胞自身抗锥体阳性的幼儿里面有70%在血清反转后10年内复发冠心病，而随访15年的幼儿这一倍数降低到84%。远比之下，占流行病学1同型冠心病一半以上的同型1同型冠心病的得病机制还没得到充分的研究者。

越来越多的人开始用于分期系统会来定义1同型冠心病的重大突破：个锥体在出现多种肝细胞自身抗锥体时踏入第1阶段，出现摄入量异常时踏入第2阶段，出现疼痛时踏入第3阶段。一些多发肝细胞自身抗锥体阳性的个锥体，在1期和2期，重大突破较太快，并发展为得病的1同型冠心病。我们之后描绘了一分组在首次检查到多种肝细胞自身抗锥体样本后至少10年无冠心病的较太快重大突破者，这分组病症总人数少，但特点非常说明。随后，我们推测肝细胞自身抗原特异性CD8+T细胞连锁反不宜反不宜在重大突破平稳的病症里面基本不依赖于，但在近期得病和值得注意的冠心病病症里面很较易检查到。这似乎表明，与重大突破病症远比，这些病症自身免疫反不宜的可调增强。

早期研究者表明，尽管可调性T细胞连锁反不宜(Treg)数量较长时间，但冠心病病症依赖于一些功能缺陷，其里面包括对IL-2的反不宜灵活性减少。此外，冠心病病症里面的现像CD4+T细胞连锁反不宜似乎对可调突显抵抗性，发挥为现像T细胞连锁反不宜的抑制作用逼近，连续性产生的Treg和锥体外产生的诱导Treg，以及抗原经历的CD4+T细胞连锁反不宜里面IL-2反不宜逼近。本研究者的目的是描绘了CD4+可调性T细胞连锁反不宜(Treg)在海岸边极平稳重大突破者里面的特点，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究者是一项以人群依此的纵向研究者，在21岁以下肺炎的病症直系亲属里面检查1同型冠心病的危险因素。我们之后描绘了长期平稳重大突破者的特点，他们持续保持多重肝细胞自身抗锥体阳性大约10年，但没出现冠心病的流行病学疼痛，太快性或非完成性自身免疫。随后，10名之后持续保持无冠心病并愿意提供大量血液样本的平稳重大突破者纳入T和B细胞连锁反不宜功能数据分析。在目前的研究者里面，8名太快重大突破者(SP分组)，里面位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁错综复杂的肝细胞自身抗锥体阳性。所有的组织者都受制于1同型冠心病重大突破的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞自身抗锥体对某些抗原的阳性反不宜，然而，一名病症并未受制于2期至少6年，但没出现流行病学疼痛，一名病症被病人为冠心病，该受试者72岁，在采集实验样本时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据数据分析里面对该供锥体完成了分开分析报告。分开外周血单个连锁反不宜细胞连锁反不宜(PBMCs)，采用多变量流式细胞连锁反不宜术和T细胞连锁反不宜抑制作用飞行测试分析报告供锥体里面Treg的kHz、特异性和功能。用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和转回)完成无监督聚类数据分析，分析报告Treg特异性。

结果：与保健供锥体远比，来自太快重大突破锥体的遗忘CD4+T细胞连锁反不宜的监督聚类表明，激活的遗忘CD4+ TregkHz降低，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)解读降低有关。一名HbA1c升高的病症与重大突破平稳者和冗余的对不宜分组远比，Treg小曲有所不同。功能数据分析表明，与保健供锥体远比，来自平稳重大突破锥体的Treg诱导的CD4+现像T细胞连锁反不宜抑制作用明显受到影响。发挥为对现像CD4+T细胞连锁反不宜CD25和CD134解读的抑制作用降低。

示意图1 深入的特异性数据分析表明，CD4+Treg亚同型在太快重大突破字段里面降低。由FlowSOM生成的Treg房，聚集在来自所有供锥体的活CD4+CD45RA -细胞连锁反不宜上。根据标有物解读鉴定出10个元簇:遗忘T细胞连锁反不宜_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T细胞连锁反不宜;HLA-DR + GITR +遗忘T细胞连锁反不宜;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)用于9个不同Treg标有生成的10个元簇的MST。每个节点代表一个战略性(100个战略性)，巨大的元战略性(10个元战略性)在节点分组周边上色。每个节点里面的甜品示意图问到单个标有的解读级别。(b)每个元聚类的热示意图，以表明整锥体标有解读。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)生成示意图，以及FlowSOM标识的每个元簇的表层。(e-l)相对来说数量级为每个metacluster盒线示意图(数量级> 0.05%)确定为HD和SP分组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T细胞连锁反不宜(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T细胞连锁反不宜(l)。深红色红色代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 用于CITRUS的预测模同型证实，TregkHz的降低是重大突破平稳的图标。分级旁路(a - f)和柑橘数据分析(g-k)更为SP组织者和冗余的HD组织者在CD4+CD45RA−T细胞连锁反不宜上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群锥体的传奇色彩示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR解读完成分开，模拟FlowSOM群锥体。(b) HD(黑点)和SP(杂色)分组以及供锥体SP 606(深红色)里面CD25+ cd127的kHz摘要示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+旁路偏序的盒线示意图;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读强度著色，箭头突出的簇被标识为SP和HD字段错综复杂的不同。(j)盒线示意图表明了在SP(杂色)和HD(灰点)分组里面，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的相对来说数量级(倍数)。(k)直方示意图表明每个簇的特异性(粉红色)和Treg标有相对来说解读与背景解读(红色);上列，闪存Treg_3;比如说一行，闪存Treg_4。背景与所有其他簇里面标有的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

示意图3 与保健献血者远比，重大突破平稳者遗忘treg的GITR降低。每个遗忘CD4+T细胞连锁反不宜元簇(遗忘T细胞连锁反不宜_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T细胞连锁反不宜;HLA-DR + GITR +遗忘T细胞连锁反不宜;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检查每个解读标有的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)字段的解读热示意图(sp606不包括在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇里面所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(深红色)的FlowSOM GITR解读并联，表明直方示意图(c)和摘要示意图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(深红色)所有供锥体包括，p< 0.05(红色)供锥体SP 606和冗余的HD不包括在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR解读，从分级旁路，从所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(深红色)并联，表明直方示意图(e)和摘要示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

示意图4 来自平稳重大突破的CD4+ treg细胞连锁反不宜控制现像CD4+T细胞连锁反不宜的灵活性减少。SP分组用红色的线和红色问到，HD分组用黑色的线和红色问到，深红色的线/红色问到供锥体sp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞连锁反不宜完成分选。CD4+CD25−(接收者者)被标有为CFSE, Treg按观察的倍数高锰酸钾。用抗CD3 /28微珠活化细胞连锁反不宜，培训3翌日完成流式细胞连锁反不宜术检查。(a-d)与CD4+接收者者相对来说不宜的treg培训(自锥体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD接收者者培训。(a,b,f) CFSE诱导(a,e)和CFSE抑制作用倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用倍数。用于阳性对不宜(激活的响不宜细胞连锁反不宜分别为treg)计算抑制作用倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重更为测试

示意图5 现像CD4+T细胞连锁反不宜对平稳重大突破的T细胞连锁反不宜活化的抑制作用更脆弱。SP分组用红色的线和红色问到，HD分组用黑色的线和红色问到，深红色的线/红色问到供锥体sp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞连锁反不宜完成分选。CD4+CD25−(接收者者)被cfsel标有，treg按观察的倍数高锰酸钾。用抗CD3 /28微珠活化细胞连锁反不宜，培训3翌日完成流式细胞连锁反不宜术(CD25反染)和细胞连锁反不宜因子数据分析。HD Treg与HD、SP或sp606接收者者共同培训。(a,b) CFSE诱导(a)和CFSE抑制作用次之(b)。(c,d) CD25抑制作用次之(c)和CD134抑制作用次之(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训里面的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重更为测试

结论：我们得出的结论是，来自平稳重大突破子的活化遗忘CD4+Treg在GITR解读里面得到了扩展和珍贵，强调了进一步研究者Treg在1同型冠心病风险个锥体里面的差异性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28