Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者重大突破缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现肾脏自身免疫到显现1改进型白血病临床症状的的发展率在儿童时期就有很好的说明了，多个肾脏自身免疫白血病的儿童中的有70%在血清叠加后10短期内患上白血病，而随访15年的儿童这一数目减小到84%。来得之下，分之一临床1改进型白血病一半以上的改进型1改进型白血病的中风机制还不能得到应以有的分析。

越来越多的人开始用到分期系统来假设1改进型白血病的的发展：性状在显现多种肾脏自身免疫时转回第1以前，显现血糖异常时转回第2以前，显现症状时转回第3以前。一些多发肾脏自身免疫白血病的性状，在1期和2期，的发展较慢，并发展为中风的1改进型白血病。我们以前说明了了各别在首次检测到多种肾脏自身免疫比对后至少10年无白血病的太快的发展者，这第三组症状人数少，但特征非常明确。随后，我们发现肾脏自身蛋白质特异性CD8+T细胞核反应以在的发展想像中快的症状中的前提不存在，但在近期中风和长期存在的白血病症状中的很较易检测到。这可能表明，与的发展症状来得，这些症状自身特异性的调节增强。

后期得出结论，尽管调节性T细胞核(Treg)数量正常，但白血病症状存在一些功用缺陷，其中的包括对IL-2的反应以能力减少。此外，白血病症状中的的现象CD4+T细胞核可能对调节更具抵抗性，表现为现象T细胞核的正向逼近，共存产生的Treg和体外产生的正向Treg，以及蛋白质经历的CD4+T细胞核中的IL-2反应以逼近。本分析的目标是说明了了CD4+调节性T细胞核(Treg)在一小群想像中想像中快的发展者中的的特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间段为18-32年。

方法：BOX分析是一项以人群为基础的纵向分析，在21岁以下肺癌的症状亲属中的检查1改进型白血病的危险状况。我们以前说明了了长期想像中快的发展者的特征，他们保持一致多重肾脏自身免疫白血病超过10年，但不能显现白血病的临床症状，慢性或非透过性自身免疫。随后，10名在此期间保持一致无白血病并愿意备有大量体液比对的想像中快的发展者扩展到T和B细胞核功用归纳。在目前的分析中的，8名慢的发展者(SP第三组)，中的位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的肾脏自身免疫白血病。所有的发起者都处于1改进型白血病的发展的1期，尽管一些人随后失去了肾脏自身免疫对某些蛋白质的白血病反应以，然而，一名症状已经处于2期至少6年，但不能显现临床症状，一名症状被诊断为白血病，该受试者72岁，在采集科学实验比对时，其HbA1c上升到53 mmol/mol(7%)，在数据归纳中的对该NADPH透过了单独评核。分离外周血单个核细胞核(PBMCs)，采用多参数流式细胞核妖术和T细胞核正向试验评核NADPH中的Treg的频率、表现改进型和功用。用到FlowSOM和CITRUS(聚类核对、表征和回归)透过无行政官员聚类归纳，评核Treg表现改进型。

结果：与肥胖症NADPH来得，来自慢的发展体的心灵CD4+T细胞核的行政官员聚类标示出，介导的心灵CD4+ Treg频率减小，与糖皮质激素正向的TNFR之外蛋白(GITR)传达减小有关。一名HbA1c上升的症状与的发展想像中快者和也就是说的准确率来得，Treg磬有所多种不同。功用归纳表明，与肥胖症NADPH来得，来自想像中快的发展体的Treg介导的CD4+现象T细胞核正向明显受到影响。表现为对现象CD4+T细胞核CD25和CD134传达的正向减小。

所示1 深入的表现改进型归纳标示出，CD4+Treg亚改进型在慢的发展链表中的减小。由FlowSOM转化成的Treg室，聚集在来自所有NADPH的活CD4+CD45RA -细胞核上。根据标示物传达核对成10个元簇:心灵T细胞核_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;心灵T cell_4;CD49b心灵T细胞核;HLA-DR + GITR +心灵T细胞核;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)用到9个多种不同Treg标示转化成的10个元簇的MST。每个节点代表一个空降兵(100个空降兵)，相当大的元空降兵(10个元空降兵)在节点第三组周围制做。每个节点中的的饼所示对此单个标示的传达层级。(b)每个元聚类的热所示，以标示出前提标示传达。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)转化成所示，以及FlowSOM辨认的每个元簇的较厚。(e-l)来得重元素为每个metacluster箱中的央相所示(重元素> 0.05%)确定为HD和SP第三组:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +心灵T细胞核(h)、心灵T cell_1(i),心灵T cell_2 (j),心灵T cell_3 (k) n d CD49b心灵T细胞核(l)。浅蓝色白点代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩筛选。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 用到CITRUS的估测证实，Treg频率的减小是的发展想像中快的标志。标准门控(a - f)和柑橘归纳(g-k)比较SP发起者和也就是说的HD发起者在CD4+CD45RA−T细胞核上的歧异。(a)流感病毒CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会群体的标志性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR传达透过分离，模拟FlowSOM社会群体。(b) HD(白点)和SP(白点)第三组以及NADPHSP 606(浅蓝色)中的CD25+ cd127的频率概述所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控弟集的箱中的央相所示;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达强度后处理，标示突成的簇被辨认为SP和HD链表之间的多种不同。(j)箱中的央相所示标示出了在SP(白点)和HD(灰点)第三组中的，CITRUS心灵Treg_3和Treg_4的来得重元素(数目)。(k)直方所示标示出每个簇的表现改进型(粉红色)和Treg标示来得传达与背景传达(粉红色);上列，寄存器Treg_3;下面一行，寄存器Treg_4。背景与所有其他簇中的标示的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩筛选

所示3 与肥胖症献血者来得，的发展想像中快者心灵treg的GITR减小。每个心灵CD4+T细胞核元簇(心灵T细胞核_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;CD49b +心灵T细胞核;HLA-DR + GITR +心灵T细胞核;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个传达标示的巨大变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)链表的传达热所示(sp606不包括在内)。(c,d)心灵Treg_4元簇中的所有HD(紫色)、所有SP(粉红色)和SP 606(浅蓝色)的FlowSOM GITR传达串接，标示出直方所示(c)和概述所示(d)。Wilcoxon配对符号秩和筛选，p< 0.07(浅蓝色)所有NADPH包括，p< 0.05(粉红色)NADPHSP 606和也就是说的HD不包括在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR传达，从标准门控，从所有HD(紫色)、所有SP(粉红色)和SP 606(浅蓝色)串接，标示出直方所示(e)和概述所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩筛选

所示4 来自想像中快的发展的CD4+ treg细胞核控制现象CD4+T细胞核的能力减少。SP第三组用粉红色的中的央线和白点对此，HD第三组用粉红色的中的央线和白点对此，浅蓝色的中的央线/白点对此NADPHsp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核透过分选。CD4+CD25−(这样的话者)被标示为CFSE, Treg按注意到的数目滴定。用抗CD3 /28微珠活化细胞核，养成3天后透过流式细胞核妖术检测。(a-d)与CD4+这样的话者来得应以的treg养成(增生)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者养成。(a,b,f) CFSE再生(a,e)和CFSE正向多于(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的正向多于。用到白血病对照(介导的拥护以细胞核不含treg)计算正向多于。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

所示5 现象CD4+T细胞核对想像中快的发展的T细胞核活化的正向更敏感。SP第三组用粉红色的中的央线和白点对此，HD第三组用粉红色的中的央线和白点对此，浅蓝色的中的央线/白点对此NADPHsp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核透过分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel标示，treg按注意到的数目滴定。用抗CD3 /28微珠活化细胞核，养成3天后透过流式细胞核妖术(CD25反染)和细胞核因弟归纳。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者合作养成。(a,b) CFSE再生(a)和CFSE正向百分比(b)。(c,d) CD25正向百分比(c)和CD134正向百分比(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共养成中的的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得成的结论是，来自想像中快的发展弟的活化心灵CD4+Treg在GITR传达中的得到了扩展和丰富，强调了促使分析Treg在1改进型白血病风险性状中的的差异性的必要性。

出处成处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28